| Título: | EFECTO DE LA FUERZA IÓNICA EN EL NÚMERO DE SITIOS ACTIVOS FUNCIONALES DE LA BETAÍNA ALDEHÍDO DESHIDROGENASA RENAL |
| Autores: | DALIA ISABEL RIOS GARCIA |
| Fecha: | 2014-02 |
| Publicador: | CIAD |
| Fuente: |
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| Tipo: |
info:eu-repo/semantics/masterThesis info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
| Tema: |
info:eu-repo/classification/Bioquímica/Ciencias de los alimentos info:eu-repo/classification/cti/2 info:eu-repo/classification/cti/23 info:eu-repo/classification/cti/2302 info:eu-repo/classification/cti/230290 |
| Descripción: | "la betaína aldehído deshidrogenasa renal (BADH EC 1.2.1.8), sintetiza glicina betaína, importante osmoregulador y osmoprotector de las células de la medula renal. Estudios previos de inactivación por reactivos específicos de grupos sulfidrilo sugirieron que no todos los sitios activos de la enzima eran funcionales, posteriormente estudios de titulación con NAD+ demostraron que solo la mitad de los sitios activos son funcionales a la vez. Además, se demostró que la fuerza iónica protege la actividad de la BADH en presencia de altas concentraciones de urea y de alta temperatura. Con base a los estudios previos, el objetivo de este trabajo fue analizar el efecto de la fuerza iónica en el número de sitios activos funcionales de la betaína aldehído deshidrogenasa renal. Se tituló BADH con el sustrato NAD+ en presencia de diferentes condiciones de fuerza iónica dadas por KCl, NaCl y MgCl2. La interacción se siguió mediante fluorescencia y absorción electrónica. Los espectros de absorbancia mostraron diferencias en la interacción BADH-NAD dependientes del tipo de sal utilizada y aumentos en la absorbancia a 260 nm en presencia de MgCl2, indicando una disminución en la afinidad de BADH por el NAD+. El análisis del apagamiento de la emisión, mostró que a pH 8 y pH 7 los datos siguen un decaimiento exponencial. La afinidad de los sitios activos se analizó mediante la ecuación de Scatchard mostrando un decaimiento en dos fases para todas las condiciones probadas a pH 8. En presencia de pH 7 sin embargo, se muestra un comportamiento sigmoidal (R2= 0.99). El número de sitios activos (n) se calculó mediante el inverso de la pendiente, encontrándose a pH 8 dos sitios activos en presencia de todas las sales y concentraciones utilizadas. A pH 7 el número de sitios activos calculados varió entre 3 y 4, presentándose el mayor número de sitios activos en presencia de fuerza iónica baja proporcionada por KCl. Las Kd’s obtenidas a pH 7 mantienen el mismo comportamiento que a pH 8 y valores similares, donde la constante de menor valor se observa a fuerza iónica baja proporcionada por KCl. Los datos obtenidos durante este estudio muestran que la fuerza iónica no modifica el número de sitios activos funcionales de la BADH renal, pero si produce cambios en la estructura terciaria así como afectación en el valor de la Kd. Además se obtuvo evidencia de que el número de sitios activos es modificado por el pH encontrándose cuatro sitios activos a pH fisiológico." |
| Idioma: | spa |
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