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Título: Characterization of ABC transporters in both mammalian cells (ABCG2, ABCC2)and «plasmodium falciparum (Pgh1)»
Autores: Leimanis, Mara Laura
Fecha: 2008
Publicador: McGill University - MCGILL
Fuente:
Tipo: Electronic Thesis or Dissertation
Tema: Biology - Cell
Descripción: In the first part of the thesis two ABC transporters in mammalian cells are explored. Initially, the expression of members of the ABC family of transporters in erythrocytes was measured. It was found that ABCG2 (also known as the breast cancer resistance protein, BCRP, the mitoxantrone resistance protein, and ABC placenta) was expressed in mature human erythrocytes. This work concentrated on characterizing the oligomerization of ABCG2 in membrane extracts from tumour cells and human erythrocytes. Given the ability of ABCG2 to transport protoporphyrin IX or heme, these findings may shed some light on the normal function of erythrocytes. The second chapter of the thesis attempts to elucidate the drug binding characteristics of ABCC2 (MRP2). A radiolabelled photoreactive analogue of LTC4 (IAALTC4) was synthesized and used to carry out photoaffinity labelling experiments; a technique used to predict drug binding to a target protein. LTC4 is an endogenous substrate of ABCC2 since previous reports have shown LTC4 transport by ABCC2. Our binding studies revealed specific photoaffinity labelling of IAALTC4 to ABCC2 transfected cells. This work shows for the first time the direct binding of LTC4 to ABCC2, and further expands on the current biochemical knowledge of ABCC2. The long-standing drug of choice to treat malaria, chloroquine (CQ), is no longer effective due to increasing drug resistance. The lack of both new drug development and a clear understanding of the mechanism(s) of drug resistance have made achieving the global initiative to halve the malaria burden by the year 2010 more problematic; this aim now requires alternative methods of treatment to CQ. Therefore, the second main objective of this thesis was to address the growing problem of malaria drug resistance by exploring alternative therapies and a potential modulator of CQ resistance. In the third chapter, modulators of MRP1-mediated resistance were explored in chloroquine-sensitive and -resista
Dans la première partie de la thèse, deux transporteurs ABC ont été explorés. Initialement, nous avons fait l'analyse des protéines ABC (ATP-binding cassette) dans le globules rouges, en examinant leur niveau d'expression au niveau de leur membrane. Nous avons observé que ABCG2 aussi appelé : "breast cancer resistant protein,-BCRP", "mitoxantrone resistant protein", et "ABC placental", était exprimé dans les globules rouges matures. Ce travaille s'est concentré sur la caractérisation de l'oligomérization de ABCG2 dans la membrane des cellules cancéreuses et dans les globules rouges humaines. Nous savons déjà que ABCG2 transporte la protoporphyrin IX ou hème, alors nous souhaitons que ces résultats ajoutent à la connaissance de la fonction normale des globules rouges. Dans le deuxième chapitre, nous avons exploré les caractéristiques de liaison de ABCC2 (MRP2) avec les substrats. En utilisant un analogue photoréactif de LTC4 (IAALTC4) marqué pour faire des études de photoaffinités, une technique fut utilisée pour prédire la liaison d'un composé sur une protéine. La LTC4 est un substrat naturel (endogène) de ABCC2 et des résultats établis antérieurement ont montré le transport de LTC4 par ABCC2. Nos études de liaisons en photoaffinité demontrent spécifiquement que IAALTC4 trace les cellules transfectées avec ABCC2. Ces résultats montrent pour la première fois, la liaison de LTC4 à ABCC2, tout en nous apportant plus d'information biochimique sur ABCC2. La Chloroquine (CQ) est l'agent chimiothérapeutique le plus rèpandu pour combattre et traiter la malaria; toutefois son efficacité est en constante décroissance due à une résistance du parasite rependue mondialement. Les organismes mondiaux de santé préconisent l'utilisation de type de traitements visant une réduction de 50% du paludisme pour l'année 2010. Toutefois, le manque de nouvelles molécules et l'absence d'une compréhension claire des mécanismes$
Idioma: en