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Título: Telomerase regulation by alternative slicing
Autores: Khondaker, Shanjadia
Fecha: 2012
Publicador: McGill University - MCGILL
Fuente:
Tipo: Electronic Thesis or Dissertation
Tema: Biology - Molecular
Descripción: Telomerase, the main mechanism for telomere maintenance, is active in 85% of cancer cells. Telomerase inhibition leads to telomere erosion, chromosome damage, and cell death, thereby validating the enzyme as a prime target in the search for anticancer therapies. hTERT genome analysis revealed the potential for complex splicing patterns that may reflect a specific aspect of telomerase regulation in proliferation, differentiation and apoptosis (Sykorova and Fajkus 2009).A number of alternatively-spliced TERT mRNAs in vertebrates and plants have been identified, yet their role in telomere maintenance and cell survival is poorly characterized. We have identified several novel mTERT variants and are pursuing characterization of two variants, one contains an in-frame insertion in the N-terminus (Ins-i1[1-102]), a region important for binding to the telomerase RNA and telomeric substrates, and the other a C-terminally located deletion (Del-e12[1-40] in the RT domain that generates a premature stop codon and encodes a protein lacking the C-terminus. In-vitro, the alternatively spliced mTERT variants display decreased telomerase activity, most likely due to their defect in template RNA and telomeric DNA binding affinities. For the deletion variant, this decrease in activity was consistent in telomerase positive cells, which, by middle passage, appeared to have a noticeable growth defect. By acquiring a detailed understanding of mouse TERT alternative splicing, we can advance our knowledge on telomerase regulation and new mechanisms for inhibiting telomerase in tumour cells.
La télomérase est le mécanisme principal de maintien des télomères et est actif dans 85% des cellules cancéreuses. L'inhibition de la télomérase entraîne l'érosion des télomères, des lésions chromosomiques et la mort cellulaire, ce qui démontre que cette enzyme pourrait être une cible importante dans la recherche de thérapies anticancéreuses. L'analyse du génome de la télomérase a révélé le potentiel des motifs d'épissage complexes qui peuvent démontrer un aspect spécifique de la régulation de l'enzyme dans la prolifération, la différenciation et l'apoptose (Sykorova and Fajkus 2009)Un certain nombre d'ARNm TERT alternativement-épissés ont été identifiées chez les vertébrés et les plantes, mais leurs rôles dans le maintien des télomères et la survie cellulaire sont mal caractérisés. Nous avons identifié plusieurs nouvelles variantes de TERT murine et, en parallèle, nous poursuivons la caractérisation de deux autres variantes. La première variante, Ins-i1[1-102], contient une insertion en cadre de lecture, dans le domaine N-terminal qui une région importante pour la l'attachement aux ARN de la télomérase et aux substrats d'ADN télomérique. La deuxième variante est une délétion localisée dans le domaine C-terminal. Celle-ci est plus spécifiquement située dans le domaine RT qui génère un codon stop prématuré et code pour une protéine manquant sa partie C-terminale, Del-e12 [1-40]. In-vitro, les activités télomériques des variantes mTERT sont diminuées, probablement dû à leur manque d'affinité pour l'ADN et l'ARN télomérique. Pour la variante Del-e12 [1-40], cette baisse d'activité a été confirmée dans des cellules télomérase-positives qui, après un certain nombre de passages, semblent développer des déficiences de croissance. La compréhension détaillée des mécanismes de l'épissage alternatif de la TERT murine pourrait contribuer à l'amélioration de nos connaissances sur les différentes méthodes de régulation de la télomérase. Ceci pourrait aussi aboutir à la découverte de nouveaux mécanismes d'inhibition de la télomérase dans les cellules tumorales.
Idioma: en